SwePub
Sök i LIBRIS databas

  Utökad sökning

onr:"swepub:oai:DiVA.org:kth-20681"
 

Sökning: onr:"swepub:oai:DiVA.org:kth-20681" > Engineering of a gl...

Engineering of a glycosidase Family 7 cellobiohydrolase to more alkaline pH optimum : the pH behaviour of Trichoderma reesei CeI7A and its E223S/A224H/L225V/T226A/D262G mutant

Becker, D. (författare)
Braet, C. (författare)
Brumer, Harry (författare)
KTH,Bioteknologi
visa fler...
Claeyssens, M. (författare)
Divne, Christina (författare)
KTH,Bioteknologi
Fagerstrom, B. R. (författare)
Harris, M. (författare)
Jones, T. A. (författare)
Kleywegt, G. J. (författare)
Koivula, A. (författare)
Mahdi, S. (författare)
Piens, K. (författare)
Sinnott, M. L. (författare)
Stahlberg, J. (författare)
Teeri, Tuula T. (författare)
KTH,Bioteknologi
Underwood, M. (författare)
Wohlfahrt, G. (författare)
Claeyssens, M (författare)
Braet, C (författare)
Teeri, TT (författare)
Sinnottt, ML (författare)
Wohlfart, G (författare)
Divne, C (författare)
Uppsala universitet,Institutionen för cell- och molekylärbiologi,Strukturell molekylärbiologi
Fagerström, VM (författare)
Brumer, H (författare)
Ståhlberg, J (författare)
Koivula, A (författare)
Becker, D (författare)
Jones, TA (författare)
Uppsala universitet,Institutionen för cell- och molekylärbiologi,Strukturell molekylärbiologi
Piens, K (författare)
Harris, M (författare)
Uppsala universitet,Institutionen för cell- och molekylärbiologi,Strukturell molekylärbiologi
Kleywegt, GJ (författare)
Uppsala universitet,Institutionen för cell- och molekylärbiologi,Strukturell molekylärbiologi
Underwood, M (författare)
Mahdi, S (författare)
visa färre...
 (creator_code:org_t)
2001
2001
Engelska.
Ingår i: Biochemical Journal. - 0264-6021 .- 1470-8728. ; 356, s. 19-30
  • Tidskriftsartikel (refereegranskat)
Abstract Ämnesord
Stäng  
  • The crystal structures of Family 7 glycohydrolases suggest that a histidine residue near the acid/base catalyst could account for the higher pH optimum of the Humicola insolens endoglucanase Cel7B, than the corresponding Trichoderma reesei enzymes. Modelling studies indicated that introduction of histidine at the homologous position in T. reesei Cel7A (Ala(224)) required additional changes to accommodate the bulkier histidine side chain. X-ray crystallography of the catalytic domain of the E223S/A224H/L225V/T226A/D262G mutant reveals that major differences from the wild-type are confined to the mutations themselves, The introduced histidine residue is in plane with its counterpart in H. insolens Cel7B, but is 1.0 Angstrom (= 0.1 nm) closer to the acid/base Glu(217) residue, with a 3.1 Angstrom contact between N-2 and O'(1). The pH variation of k(cat)/K-m for 3,4-dinitrophenyl lactoside hydrolysis was accurately bell-shaped for both wildtype and mutant, with pK(1) shifting from 2.22+/-0.03 in the wild-type to 3.19+/-0.03 in the mutant, and pK(2) shifting from 5.99+/-0.02 to 6.78+/-0.02. With this poor substrate, the ionizations probably represent those of the free enzyme. The relative k(cat) for 2-chloro-4-nitrophenyl lactoside showed similar behaviour. The shift in the mutant pH optimum was associated with lower k(cat)/K-m values for both lactosides and cellobiosides, and a marginally lower stability. However, k(cat) values for cellobiosides are higher for the mutant. This we attribute to reduced nonproductive binding in the +1 and +2 subsites; inhibition by cellobiose is certainly relieved in the mutant. The weaker binding of cellobiose is due to the loss of two water-mediated hydrogen bonds.

Nyckelord

cellulase
cellulose
endoglucanase
enzyme kinetics
pH-dependence
sequence-based classification
free r-value
endoglucanase-i
crystal-structures
catalytic nucleophile
angstrom resolution
fusarium-oxysporum
humicola insolens
identification
cellulose

Publikations- och innehållstyp

ref (ämneskategori)
art (ämneskategori)

Hitta via bibliotek

Till lärosätets databas

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.

 
pil uppåt Stäng

Kopiera och spara länken för att återkomma till aktuell vy