| 1. |
- Nyhlén, Kristina, et al.
(författare)
-
Corticosteroids and interferons inhibit cytokine-induced production of IL-8 by human endothelial cells
- 2000
-
Ingår i: Cytokine. - : Elsevier BV. - 1043-4666 .- 1096-0023. ; 12:4, s. 355-360
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- IL-8, secreted by endothelial cells at the site of inflammation, participates in recruitment and transmigration of leukocytes. IL-8 may also have pathophysiological consequences in inflammatory and immunological disorders. We have investigated the effect of interferons (IFNs) and glucocorticosteroids (GCs) on cytokine induced secretion and production of IL-8 by human umbilical endothelial cells (HUVEC). There was a low spontaneous secretion of IL-8 by unstimulated HUVEC which increased after 6 or 24 h of stimulation with the pro-inflammatory cytokines TNF-α or IL-1β. IFN-γ as well as the GCs, Dexamethasone and Budesonide, inhibited TNF-α induced IL-8 secretion in a dose-dependent manner. IFNs may have a general modulating effect, since IFN-α also inhibited the TNF-α-induced IL-8 secretion. There was a slight, but significant, increase in the content of intracellular IL-8 in stimulated HUVEC. However, there was no difference between stimulation with IL-1β or TNF-α alone or in combination with IFNs or GCs, whereas inhibition of IL-8 secretion with monensin increased IL-8 content suggesting that IFNs and GCs inhibit synthesis rather than secretion of IL-8. In conclusion, IFNs or GCs may be useful for inhibiting IL-8 production by endothelial cells and could thus be used for therapeutic modulation of the inflammatory response.
|
|
| 2. |
- Nyhlén, Kristina, 1967-
(författare)
-
Leukocyte sequestration associated with inflammation : mechanisms and modulations
- 2003
-
Doktorsavhandling (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- Inflammationsreaktionen är kroppens första försvar mot främmande partiklar t ex bakterier. Det är en komplex reaktion som bl a karakteriseras av att vita blodkroppar dras till det inflammerade området och att vätskao i blodet lättare tar sig igenom kärlväggen till vävnaden dvs det svullnar. Neutrafiler är en vit blodkropp, som samlas vid inflammationer och oskadliggör fi·ämmaode partiklar genom att fagocytera ("äta upp") dem, släppa ut giftiga ämnen och bilda fria syreradikaler. För att komma från blodet till den inflaonnerade vävnaden fastnar neutrofilema på kapillärväggen och tar sig sen igenom väggen. Vid inflammatoriska sjukdomar t ex reumatism ansamlas också neutrofiler, men angriper då istället kroppens egen vävnad. Vissa kliniska behaodlingar orsakar också att neutrafiler ansamlas t ex i lungorna vid hemodialys, men det är oklart om de har någon skadaode effekt på lungvävnaden. Det är däremot känt att en del hemodialyspatienter efter flera års behaodliog har problem med lungorna. Att förstå och blockera mekanismerna för ansamling av neutrafiler har därför stor betydelse vid många sjukdomar.I delarbete l studerades vilken effekt ansamlade neutrafiler har på lungvävnaden och lungfunktionen och för detta ändarnål utvecklades en variant av en försöksuppställning med en marsvinslunga upphängd i ett glaskärl. Lungan "andades", cirkulerades med blod och flera parametrar registrerades hela tiden. Modellen visade sig vara stabil med lungor som bl a var mindre vätskefyllda än i tidigare studier och hade ett högt syreinnehåll trots "andning" med rumsluft. För att påvisa systemets känslighet, tillfördes två substanser med känd effekt på kärlväggarna, histamin och oljesyra. Lungorna som fick oljesyra eller histamin reagerade som väntat med ökat kärhnotstånd, ökad genomsläpplighet för vätska genom kärlväggen samt ökat neutroftlinnehåll i lungan, vilket bevisade att lungmodellen var en pålitlig och känslig metod.I delarbete 2 simulerades en dialysbehaodliog med dialysmembraoet Cuprophan i lungmodellen, för att studera vad som händer i lungan när neutrafiler ansamlas. Hos hemodlalys-patienter fastnar flertalet av alla cirkulerande neutrafiler ca 15 min efter dialysstart och lossnar sedan efterhand under behandlingen. I lungmodellen visade det sig dock att utao dialysmembran fastnade ca 70 % av det totala antalet cirkulerande neutrafiler i lungan och var kvar under de två timmar långa försöken. För att kunna studera om lungvävnaden och andningen förändrades när neutrafilerna fastnade i lungao, järnfördes därför lungor med cirkolation av blod utao vita blodkroppar med lungor med cirkulation av normalt blod. Resultaten tydde på att neutrafiler kao fastna vid kapillärväggama i lungao utan att påverka genomsläppligheten för vätska eller bildaodet av fiia syreradikaler. Neutrafilerna fastnade aotagligen inte via de molekyler som nmmalt langar upp cirkulerande neutrafiler vid inflammationer. Dialysmembranet lyckades inte heller mätbart aktivera neutrofilema, men trots det har en del hernodialyspatienter som fått dialys länge vätskeansamling i lungorna.Förflyttningen av neutrafiler mot en inflammation startar bl a av att ämnena TNF-α och IL-1ß utsöndrade från inflammationsområdet stimulerar kapillärväggens celler, endotelcellema. I endatelcellerna aktiveras då faktorn NF-κB och celleroa börjar producera olika änmen för att locka till sig cirkulerande neutrafiler bl a släpper de ut ämnet IL-8 och molekylerna selekliner bildas på deras yta. IL-8 är specialiserad på att dra till sig neutrofiler och t ex patienter med inflammatoriska sjukdomar och autoimmuna sjukdomar typ reumatism har forhöjda halter av IL-8. De cirkulerande neutroftlerna hromsas av molekylerna selekliner på endotelcellemas yta och binder löst till dem via kolhydratstrukturer på sin egen yta. Denna bindning leder i sin tur till att IL-8 kan binda till sin receptor på neutrofilerna. Nu ökar molekylerna ß2-integriner på neutrofilemas yta och dessa binder hårt till en annan molekyl på endotelcellema.I delarbete 3 undersöktes om ämnena interferoner och glukokortikosteroider kunde hämma IL-8 utsläppet från endotelceller. Glukokortikosteroider är mycket använda som läkemedel mot inflammationer och deras anti-inflammatoriska effekt fungerar antagligen via NF-κB. Interferon er är ett ämne i kroppen, som har en invecklad roll vid inflammationer men som också används vid behandling av flera sjukdomar. Humana endotelceller frän navelsträngsvener (HUVEC) stimulerades med IL-1ß eller TNF-α för att simulera en inflammationsreaktion. Både stimulering med IL-1ß och TNF-α resulterade i en enorm ökning av utsläppt IL-8. Vid stimuleringen tillsattes också tre olika interferoner och två glukokortikosteroider. Alla interferoner och steroider hännnade utsläppet av IL-8 i forhållande till dosen. Med immunoflourescence fotograferades också hur IL-8 molekylerna var placerade inuti cellen. Resultatet tydde på att det mesta av bildat IL-8 släpps ut direkt och ej lagras i cellen.I delarbete 4 undersöktes om interferoner och glukokortikosteroider också hännnade bildandet av IL-8 genom att mäta mängden IL-8 inuti HUVEC med teknikerna ELISA och flödescytometri. För att kunna mäta den totala bildningen av IL-8 blockerades utsläppet med ämnet monensin. Förutom mätning av färdiga IL-8 molekyler undersöktes också med metoden RT-PCR om genen för IL-8 aktiverats. Både interferoner och glukokortikosteroider visade sig vara effektiva hämmare av IL-8 produktionen som var igångsatt av TNF-α. Interferon hämmade dessutom den lilla mängd IL-8 som bildades i ostimulerade endotelceller, vilket antydde att det finns flera sätt att stimulera produktionen än via NF-κB.Sammanfattningsvis kan sägas att detta arbete visat att vita blodkroppar under vissa forhållande kan ansamlas vid kapillärväggen i lungan, utan att vara så mycket aktiverade att de påverkar kärlväggen. Om neutrafilerna däremot är aktiverade och fastnar via inblandning av IL-8 sknlle glukokortikosteroider och interferoner eventuellt kunna vara möjliga att använda som medicin för att motverka oönskade inflammationsreaktioner.
|
|
| 3. |
- Nyhlen, Kristina, et al.
(författare)
-
Leukocyte sequestration in isolated guinea pig lungs during extracorporeal circulation : effects on microvascular function
- 2000
-
Ingår i: Blood Purification. - : S. Karger AG. - 0253-5068 .- 1421-9735. ; 18:2, s. 121-127
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- Neutrophils accumulate in patient lungs during clinical hemodialysis and in isolated blood-perfused guinea pig lungs due to the contact between blood and extracorporeal system. However, it is unclear how these sequestered and partly activated neutrophils affect the lung microvasculature. We, therefore, studied pulmonary vascular resistance, vascular permeability, gas exchange, and oxygen free radical production in isolated guinea pig lungs during perfusion with whole blood containing partly ‘activated’ neutrophils in comparison with perfusions using leukopenic blood. We also connected a Cuprophan hemodialysis membrane to the whole-blood perfusion system in order to investigate whether a dialyzer, which may further activate leukocytes, affects lung microvascular permeability, vascular resistances, and reactive oxygen species production. The sequestered neutrophils did not seem to markedly affect the lung microvascular function, since neither the leukocyte-free perfusion nor the hemodialysis membrane altered any of the measured variables as compared with whole-blood perfusion in a system without a dialyzer. We conclude that neutrophils, whether activated by a perfusion system or by a dialysis membrane, can accumulate in isolated lungs without adversely affecting the microvascular function.
|
|
| 4. |
- Nyhlén, Kristina, 1967-, et al.
(författare)
-
Modulation of Cytokine-Induced Production of IL-8 in Vitro by Interferons and Glucocorticosteroids
- 2004
-
Ingår i: Inflammation. - 0360-3997 .- 1573-2576. ; 28:2, s. 77-88
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- Interleukin-8 (IL-8) has been implicated in the pathogenesis of inflammation and cancer. Intracellular levels of cytokine-induced IL-8 in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) were modulated using interferons and steroids to further elucidate their mechanism. Basal and cytokine-induced production of IL-8 was studied using a novel ELISA application, flow cytometry, and RT-PCR. The intracellular amount of IL-8 increased after 6-h stimulation with TNF- (30%) or IL-1ß (55%) which was doubled when Golgi transport was disrupted using monensin. IFN-γ decreased the intracellular amount of IL-8 by 60% in both unstimulated and TNF--stimulated cells, but only when secretion was blocked using monensin. Dexamethasone inhibited the TNF--induced production by 33%, but had no effect in unstimulated cells. Our study indicated that both, dexamethasone and IFN inhibit TNF--induced upregulation of IL-8 at the mRNA level. It could be speculated that they inhibit IL-8 production by affecting different gene regulatory mechanisms.
|
|
| 5. |
- Persson, Karin, et al.
(författare)
-
Nitric oxide donors and angiotensin-converting enzyme inhibitors act in concert to inhibit human angiotensin-converting enzyme activity and platelet aggregation in vitro
- 2000
-
Ingår i: European Journal of Pharmacology. - 0014-2999 .- 1879-0712. ; 406:1, s. 15-23
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- This study investigates the effects of exogenous and endogenous nitric oxide (NO) on human circulating and endothelial angiotensin-converting enzyme activity and platelet aggregation. The NO donor S-nitroso-N-acetylpenicillamine (10-8-10-6 M) significantly and dose-dependently inhibited serum angiotensin-converting enzyme activity. The concomitant addition of S-nitroso-N-acetylpenicillamine to angiotensin-converting enzyme inhibitor-treated (captopril or enalaprilat) serum, further reduced angiotensin-converting enzyme activity. In cultured endothelial cells from human umbilical veins (HUVECs), both S-nitroso-N-acetylpenicillamine and 3-morpholinosydnonimine (SIN-1) significantly reduced angiotensin-converting enzyme activity. An additative effect was seen with a combined treatment of captopril and S-nitroso-N-acetylpenicillamine. Treatment with the NO synthase inhibitor N(G)-monomethyl-L-arginine (L-NMMA) did not affect angiotensin-converting enzyme activity. Thrombin inhibited endothelial angiotensin-converting enzyme activity, an effect that was abolished when cells were pretreated with L-NMMA. Adenosine 5'-diphosphate (ADP)-induced platelet aggregation was inhibited with S-nitroso-N-acetylpenicillamine, SIN-1 and nitroglycerine. Captopril did not affect aggregation, while a high concentration of enalaprilat (10-4 M) reduced it. The concomitant addition of 10-5 M angiotensin-converting enzyme inhibitor to NO donor-treated platelets resulted in a further reduction of platelet aggregation. This effect was most evident with SIN-1 and enalaprilat. In conclusion, both exogenous and endogenous NO inhibit human angiotensin-converting enzyme activity. NO donors and angiotensin-converting enzyme inhibitors act in concert to inhibit angiotensin-converting enzyme and platelet aggregation. Copyright (C) 2000 Elsevier Science B.V.
|
|
| 6. |
- Persson, Karin, et al.
(författare)
-
NO donors and ACE inhibitors act in concert to inhibit human ACE activity and platelet aggregation in vitro
-
Annan publikation (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- This study investigates the effects of exogenous and endogenous nitric oxide (NO) on human circulating and endothelial angiotensin-converting enzyme (ACE) activity, and platelet aggregation. The NO donor S-nitroso N-acetylpenicillamine SNAP (10-8-10-6 M) significantly and dose-dependently inhibited serum ACE activity. The concomitant addition of SNAP to ACE inhibitor-treated (captopril or enalaprilat) serum, further reduced ACE activity. In cultured endothelial cells from human umbilical veins (HUVEC), both SNAP and 3-morpholinosydnonimine (SIN-1) significantly reduced ACE activity. An additative effect was seen with a combined treatment of captopril and SNAP. Treatment with the NO synthase inhibitor NG-monomethyl-L-arginine (L-NMMA) did not affect ACE activity. Thrombin inhibited endothelial ACE activity, an effect that was abolished when cells were pretreated with L-NMMA. ADP-induced platelet aggregation was inhibited with SNAP, SIN-1 and nitroglycerine (GTN). Captopril did not affect aggregation, while a high concentration of enalaprilat (10-4 M) reduced it. The concomitant addition of 10-5 M ACE inhibitor to NO donor-treated platelets resulted in a further reduction of platelet aggregation. This effect was most evident with SIN-I and enalaprilat. In conclusion, both exogenous and endogenous NO inhibit human ACE activity. NO donors and ACE inhibitors act in concert to inhibit ACE and platelet aggregation.
|
|
