| 1. |
- Althage, Magnus, et al.
(författare)
-
Cross-linking of transmembrane helices in proton-translocating nicotinamide nucleotide transhydrogenase from Escherichia coli: implications for the structure and function of the membrane domain.
- 2004
-
Ingår i: Biochimica et biophysica acta. - : Elsevier BV. - 0006-3002 .- 0005-2728. ; 1659:1, s. 73-82
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- Proton-pumping nicotinamide nucleotide transhydrogenase from Escherichia coli contains an alpha and a beta subunit of 54 and 49 kDa, respectively, and is made up of three domains. Domain I (dI) and III (dIII) are hydrophilic and contain the NAD(H)- and NADP(H)-binding sites, respectively, whereas the hydrophobic domain II (dII) contains 13 transmembrane alpha-helices and harbours the proton channel. Using a cysteine-free transhydrogenase, the organization of dII and helix-helix distances were investigated by the introduction of one or two cysteines in helix-helix loops on the periplasmic side. Mutants were subsequently cross-linked in the absence and presence of diamide and the bifunctional maleimide cross-linker o-PDM (6 A), and visualized by SDS-PAGE. In the alpha(2)beta(2) tetramer, alphabeta cross-links were obtained with the alphaG476C-betaS2C, alphaG476C-betaT54C and alphaG476C-betaS183C double mutants. Significant alphaalpha cross-links were obtained with the alphaG476C single mutant in the loop connecting helix 3 and 4, whereas betabeta cross-links were obtained with the betaS2C, betaT54C and betaS183C single mutants in the beginning of helix 6, the loop between helix 7 and 8 and the loop connecting helix 11 and 12, respectively. In a model based on 13 mutants, the interface between the alpha and beta subunits in the dimer is lined along an axis formed by helices 3 and 4 from the alpha subunit and helices 6, 7 and 8 from the beta subunit. In addition, helices 2 and 4 in the alpha subunit together with helices 6 and 12 in the beta subunit interact with their counterparts in the alpha(2)beta(2) tetramer. Each beta subunit in the alpha(2)beta(2) tetramer was concluded to contain a proton channel composed of the highly conserved helices 9, 10, 13 and 14.
|
|
| 2. |
- Kotova, Natalia, et al.
(författare)
-
Nätverk vid upptäckt av befolkningsexponering för farliga kemiska ämnen : en sammanställning av kompetens och laboratorieverksamhet bland regionala Arbets- och miljömedicinska enheter vid upptäckt av befolkningsexponering för farliga ämnen av kemiskt ursprung där livsmedel och dricksvatten kan vara en potentiell källa
- 2017
-
Rapport (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- I Livsmedelsverkets beredskapsarbete ingår att göra uppskattningar av vilka nivåer av farliga ämnen som konsumenterna får i sig via livsmedel och att tidigt upptäcka exponering som kan resultera i skadliga hälsoeffekter. Detta arbete innebär att övervakningen behöver förbättras gällande risker för kemisk exponering. I händelse av kemisk exponering av befolkningen via livsmedel eller vatten, beroende på olyckor eller antagonistiska händelser, behövs en väl samordnad kedja inkluderande bl.a. operativa aktörer samt centrala och regionala myndigheter.Denna rapport är ett resultat av krisberedskapsprojektet Nätverk vid upptäckt av befolkningsexponering för farliga kemiska ämnen som finansierats med 2:4-anslag från MSB. Projektets syfte är att bilda ett nätverk mellan olika aktörer för att skapa förutsättningar för ett bättre utnyttjande av landets samlade kapacitet och kompetens avseende provtagnings- och laboratorieanalys i avsikt att identifiera farliga kemiska ämnen i prover från människa. Nätverket är till för att skapa en effektivare beredskap vid allvarliga händelser med kemiska ämnen och/eller för övervakning av exponering för kemiska ämnen hos den svenska befolkningen.Projektet fokuserade på att inventera och förbättra kunskapsläget och laboratorieberedskap för provtagning och analys av prover från människa vid upptäckt av befolkningsexponering för farliga ämnen. Detta gäller i livsmedel och dricksvatten då ämnen av kemiskt ursprung kan vara en potentiell farlig källa. Projektet skapade ett nätverk mellan myndigheter och regionala Arbets- och miljömedicinska (AMM) enheter för att skapa förutsättningar för ett bättre utnyttjande av landets samlade kapacitet, kompetens och laboratorier inom AMM-verksamheten. För att stärka såväl regional som nationell krisberedskap när det gäller hanteringen av oönskade händelser så har projektets alla AMM-enheter i Sverige kartlagt kompetens och laboratoriekapacitet samt testat förmågan att arbeta i fält med provtagning och efterhantering av prover.Målgruppen för rapporten är de som arbetar med identifiering och riskvärdering av farliga ämnen med kemiskt ursprung i befolkningen, både vid kris och i vardagen. Nätverkets arbete resulterade bl.a. i de manualer som används vid exponering för olika typer av CBRNE-ämnen dvs. inte enbart kemiska (C-ämnen), men också biologiska (B-ämnen), radiologiska (R-ämnen), nukleära (N-ämnen) och explosiva (E-ämnen). Projektet har drivits av Livsmedelsverket i ett nära samarbete med regionala AMM-enheter och Totalförsvarets Forskningsinstitut (FOI) samt i samverkan med Folkhälsomyndigheten, Naturvårdsverket, Socialstyrelsen, Kemikalieinspektionen och Karolinska Institutet.
|
|
| 3. |
- Kuang, Qie, et al.
(författare)
-
A refined atomic model for microsomal glutathione transferase 1 from electron crystallography
-
Annan publikation (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- Microsomal glutathione transferase 1 (MGST1) is a detoxification enzyme belonging to the Membrane Associated Proteins in Eicosanoid and Glutathione Metabolism (MAPEG) superfamily. Here we have used electron crystallography of two-dimensional (2D) crystals in order to determine an atomic model of rat MGST1 in a lipid environment. The 2D crystals were of the p6 two-sided plane group symmetry. For the refinement, information to 3.5 Å resolution from 225 electron diffraction patterns recorded from specimens at tilt angles up to 66° was used. The model comprises 123 of the 155 amino acid residues, two structured phospholipid molecules, two hydrocarbon chains, and one glutathione (GSH) molecule. Interactions between subunits form trimers centered on the crystallographic three-fold axes of the unit cell. The GSH substrate binds in an extended conformation at the interface between two subunits of the trimer. The location of GSH is supported by mutagenesis data in vitro.
|
|
| 4. |
- Ålander, Johan, et al.
(författare)
-
Concentrations of brominated flame retardants (HBB, PBEB, BTBPE, DBDPE, PBDEs and HBCD) in blood serum from first-time mothers in Uppsala 1996-2017
- 2019
-
Rapport (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- Sedan 1996 har Livsmedelsverket regelbundet samlat in prover från förstföderskor i Uppsala för analys av persistenta halogenerade organiska miljöföroreningar (POP). I följande rapport redovisas halterna av de bromerade flamskyddsmedlen (BFR) PBDE och HBCD i samlingsprover av serum (3 samlingsprover per provtagningsår) insamlade 2016-2017. Dessutom har halterna av fyra nya BFR analyserats i proverna 2016-2017, det vill säga hexabrombensen (HBB), pentabrometylbensen (PBEB), 1,2-bis(2,4,6-tribromfenoxy)etan (BTBPE) and dekabromdifenyletan (DBDPE). De nya data används också för att uppdatera tidstrender för samtliga BFR för åren 1996-2017.Halterna av HBB, PBEB, BTBPE och DBDPE i de årliga samlingsproverna låg alla under detektionsgränsen (LOD). För HBB, BTBPE och PBEB låg LOD på 0,15 ng/g fett och för DBDPE på 3,1 ng/g fett.För BTBPE hade 8 årspooler halter över LOQ (1,2-6,5 ng/g fett), och 23 årspooler detekterbara halter (0,04-0,98 ng/g fett) under tidsperioden 1996-2017. Medianhalten för hela perioden 1996-2017 uppskattades till 0,46 ng/g fett, och halterna tycktes inte förändras under perioden.Bland PBDE förekom BDE-209 i högst halter under hela studieperioden (median 1,0 ng/g fett), följt av BDE-153 (0,85 ng/g fett), BDE-47 (0,70 ng/g fett), BDE-99 (0,40 ng/g fett), HBCD (0,35 ng/g fett) och BDE-100 (0,29 ng/g fett). Den uppdaterade tidstrenden för BDE-209 visar på en statistiskt signifikant minskning av halterna under studieperioden med 2,5 % per år. Koncentrationerna av BDE-153 ökade med 2 % per år. BDE-47, -99 och -100 har sjunkit med 6-8 % per år mellan 1996 och 2017. Även för HBCD detekterades en statistiskt säkerställd tidstrend med 4 % minskning per år.För år 2015-2017 har också BFR-halter i poolade prover jämförts med halter i de enskilda prover som ingår i poolerna. Resultaten visade att 22 av 90 individer hade halter som var 3 gånger högre än värdet för poolen för en eller flera BFR. Det finns således en risk att individer med hög exponering inte noteras om enbart poolade prover analyseras.
|
|
| 5. |
- Ålander, Johan, et al.
(författare)
-
Levels of chlorinated naphthalenes in mother’s milk from first-time mothers in Uppsala, Sweden: results from year 2012 to 2017.
- 2019
-
Rapport (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- Sedan 1996 har Livsmedelsverket regelbundet samlat in modersmjölk från förstföderskor i Uppsala för analys av persistenta halogenerade organiska miljöföroreningar (POP), i studien POPUP (Persistent Organic Pollutants in Uppsala Primiparas). I följande rapport redovisas halterna av polyklorerade naftalener (PCN) i poolade bröstmjölksprover från 2012 till 2017, ett samlingsprov per år (n=6). Resultaten visar inte på någon statistiskt signifikant trend under tidsperioden. Adderas tidigare analyserad data av polyklorerade naftalener i bröstmjölk från förstföderskor i Uppsala under åren 1997 – 2011 (Haglund, Liljelind et al. 2014) till ovanstående data erhålles en statistiskt signifikant nedgång (p <0,001) för total PCN, med en halveringstid på 14 år.
|
|
| 6. |
- Ålander, Johan
(författare)
-
Ligand binding and mechanism of microsomal glutathione transferase 1
- 2009
-
Doktorsavhandling (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- The homo-trimeric, membrane bound Microsomal Glutathione Transferase 1 (MGST1, EC. 2.5.1.18) belongs functionally to both the glutathione transferase family (GST) and the Membrane Associated Proteins in Eicosanoid and Glutathione Metabolism (MAPEG) superfamily. It is found in high amount in the liver, where it is localised to the endoplasmatic reticulum and the outer membrane of mitochondria. MGST1 possesses both glutathione transferase and peroxidase activity, thus protecting the organism against electrophilic, hydrophobic substances and lipid peroxidation. In this thesis, the rat MGST1 has been used both in purified form from rat livers, heterologously expressed in the bacteria E. coli BL21(DE3) strain and in stably transfected MCF7 cells over expressing the enzyme. MGST1 exhibits one-third-of-the-sites-reactivity towards glutathione, as it is capable of binding three GSH molecules but only stabilising one thiolate anion (GS-), the catalytically active form of GSH. Using electrospray mass spectrometry, binding of three GSH molecules was observed within the trimer while the monomer did not bind GSH, in agreement to the proposed binding sites at subunit interfaces (Holm, et al., (2006). J. Mol. Biol. 360(5): 934-945). The binding of GSH could be competed out with equimolar concentration of the inhibitor glutathione sulfonate. Using equilibrium dialysis three bound product molecules (GSDNB) with a global Kd of 320 μM were observed. Using the same technique analysing GSH binding confirmed previous results (Sun et al., (1997). Biochem. J. 326(Pt 1): 193-193) with one GSH bound with a Kd of 16 μM, while competition experiments using GSDNB as a marker for GSH binding showed complete exchange of GSDNB at a few mM GSH. Thus one GSH binds strongly to MGST1 while the other two bind more weakly. To obtain a Kd for more loosely bound GSH, stopped flow experiments were performed and the binding constant for the third GSH was determined to 2.5 mM. Hydrogen/deuterium (H/D) exchange has previously been used to determine GSH dependent dynamics in MGST1. GSH dependent changes were found to be localised largely in the cytosol facing regions of the enzyme (Busenlehner et al., (2004). Biochemistry 43(35): 11145-11152). Here, H/D exchange and H/D footprinting was used to further determine the binding sites for GSH and the two putative second substrate binding sites (the hydrophobic, electrophile binding site and the fatty acid/phospholipid binding site, respectively). The two latter sites were found to be localised in different parts of the enzyme and both bordered the GSH binding site. Site directed mutagenesis within the proposed GSH binding site confirmed its location. Other mutational studies revealed that two mutants (R72A and R73Q) lost saturation behaviour for GSH but had extremely high activity at high GSH concentration. These data are also consistent with the proposed GSH binding site location. Finally, a new fluorogenic substrate, based on release of a Rhodamine moiety, has been characterised with purified MGST1 and in MCF7 cells (or cell extracts) expressing MGST1 and was found to be a highly sensitive substrate for MGST1. In conclusion, the studies presented in this thesis yield a deeper understanding of the mechanism and structure of MGST1 as well as providing new experimental tools.
|
|
| 7. |
- Ålander, Johan, et al.
(författare)
-
Tidstrender av tungmetalleroch organiska klorerademiljöföroreningar i baslivsmede
- 2012
-
Rapport (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- Ett av Riksdagens 16 miljömål är ”giftfri miljö”. Mået innebä bland annat att kemiskaämnen i miljön inte hotar eller påverkar människors hälsa och ekosystemen. Konsumenternautsätts dock fortfarande för vissa föroreningar på en nivå som kan misstänkasleda till hälsoproblem. Livsmedel är ofta en viktig exponeringsväg för många av dessamiljöföroreningar.Livsmedelsverket har nu undersökt hur halterna av vissa miljöföroreningar har förändratsöver tiden i baslivsmedel (vete- och rågmjöl, vetekli) och livsmedelsproducerandedjur (nötkreatur, svin, lamm, odlad fisk, mjölk och ägg). Undersökningen har använtdata från Livsmedelsverkets livsmedelskontroll mellan 1976 och 2010. De ämnen somanalyserades var tungmetallerna kadmium, bly och kvicksilver och de svårnedbrytbaraklorerade organiska föreningarna α-hexaklorcyklohexan (α-HCH), polykloreradebifenyler (PCB), hexaklorbensen (HCB) och DDT-föreningen p,p'-DDE, även kalladePOP (persistent organic pollutants).Sammantaget visar resultaten att de riskreducerande åtgärder som hittills har vidtagitsmot kadmium- och kvicksilverförorening inte har haft någon markant effekt på halternai svenska livsmedel. För bly, HCH, PCB, HCB och DDT har dock åtgärderna i de flestafall haft positiv effekt på halterna.Kadmium.Halterna har mycket långsamt sjunkit i vete- och rågmjöl (halveringstid 80-120 år). I njure från nötkreatur, lamm och ren har halterna inte ändrats under denstuderade tidsperioden. I vetekli och svinnjure tycks kadmiumhalterna långsamt öka (fördubblingstid84 respektive 26 år). Resultaten för vetekli är dock osäkra på grund av relativtfå prover i undersökningen. Generellt sett är halterna högre i Skåne och Blekinge än iövriga delar av landet. Halterna i ren är klart högre i Västerbotten än i Jämtland och Norrbotten.De mycket långsamma förändringarna kan till viss del bero på ändrade produktionsmetoderi jordbruket, nya bearbetningsmetoder, samt ändrad foderproduktion.Bly.De riskreducerande åtgärderna har haft positiv effekt på halterna i de undersöktaproverna, med undantag för ren– där syns ingen trend. I mjölprodukterna halveradeshalterna vart 13-16 år, medan halterna i njure från nötkreatur och lamm minskadesnabbare (halveringstid 7-9 år).Kvicksilver.I odlad regnbåge var halterna oförändrade under åren 2001-2010.POP.Halterna av ämnena sjunker över tiden (halveras på 3,5-16 år). HCB i ren ochnötkreatur är dock ett undantag. I ren ökade halterna 2000 2010 med en fördubblingstidpå 10 år och i nötkreatur med en fördubblingstid på 17 år. Nötkreatur och mjölk frånSkåne och Blekinge har, generellt sett, högre halter av PCB och p,p´-DDE än i övrigalandet.
|
|
