SwePub
Sök i LIBRIS databas

  Utökad sökning

onr:"swepub:oai:DiVA.org:uu-12659"
 

Sökning: onr:"swepub:oai:DiVA.org:uu-12659" > In situ detection o...

  • Jarvius, MalinUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi (författare)

In situ detection of phosphorylated platelet-derived growth factor receptor beta using a generalized proximity ligation method

  • Artikel/kapitelEngelska2007

Förlag, utgivningsår, omfång ...

  • 2007
  • printrdacarrier

Nummerbeteckningar

  • LIBRIS-ID:oai:DiVA.org:uu-12659
  • https://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-12659URI
  • https://doi.org/10.1074/mcp.M700166-MCP200DOI
  • http://kipublications.ki.se/Default.aspx?queryparsed=id:115789046URI

Kompletterande språkuppgifter

  • Språk:engelska
  • Sammanfattning på:engelska

Ingår i deldatabas

Klassifikation

  • Ämneskategori:ref swepub-contenttype
  • Ämneskategori:art swepub-publicationtype

Anmärkningar

  • Improved methods are needed for in situ characterization of post-translational modifications in cell lines and tissues. For example, it is desirable to monitor the phosphorylation status of individual receptor tyrosine kinases in samples from human tumors treated with inhibitors to evaluate therapeutic responses. Unfortunately the leading methods for observing the dynamics of tissue post-translational modifications in situ, immunohistochemistry and immunofluorescence, exhibit limited sensitivity and selectivity. Proximity ligation assay is a novel method that offers improved selectivity through the requirement of dual recognition and increased sensitivity by including DNA amplification as a component of detection of the target molecule. Here we therefore established a generalized in situ proximity ligation assay to investigate phosphorylation of platelet-derived growth factor receptor β (PDGFRβ) in cells stimulated with platelet-derived growth factor BB. Antibodies specific for immunoglobulins from different species, modified by attachment of DNA strands, were used as secondary proximity probes together with a pair of primary antibodies from the corresponding species. Dual recognition of receptors and phosphorylated sites by the primary antibodies in combination with the secondary proximity probes was used to generate circular DNA strands; this was followed by signal amplification by replicating the DNA circles via rolling circle amplification. We detected tyrosine phosphorylated PDGFRβ in human embryonic kidney cells stably overexpressing human influenza hemagglutinin-tagged human PDGFRβ in porcine aortic endothelial cells transfected with the β-receptor, but not in cells transfected with the α-receptor, and also in immortalized human foreskin fibroblasts, BJ hTert, endogenously expressing the PDGFRβ. We furthermore visualized tyrosine phosphorylated PDGFRβ in tissue sections from fresh frozen human scar tissue undergoing wound healing. The method should be of great value to study signal transduction, screen for effects of pharmacological agents, and enhance the diagnostic potential in histopathology.

Ämnesord och genrebeteckningar

  • MEDICINE
  • MEDICIN

Biuppslag (personer, institutioner, konferenser, titlar ...)

  • Paulsson, JannaKarolinska Institutet (författare)
  • Weibrecht, IreneUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi(Swepub:uu)irewe161 (författare)
  • Leuchowius, Karl-JohanUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi(Swepub:uu)kaleu839 (författare)
  • Andersson, Ann-Catrin (författare)
  • Wählby, CarolinaUppsala universitet,Datoriserad bildanalys,Institutionen för genetik och patologi,Centrum för bildanalys(Swepub:uu)cli05194 (författare)
  • Gullberg, Mats (författare)
  • Botling, JohanUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi(Swepub:uu)johanbot (författare)
  • Sjöblom, TobiasUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi(Swepub:uu)tobisjob (författare)
  • Markova, Boyka (författare)
  • Östman, ArneKarolinska Institutet (författare)
  • Landegren, UlfUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi(Swepub:uu)ulfland (författare)
  • Söderberg, OlaUppsala universitet,Institutionen för genetik och patologi(Swepub:uu)olasoder (författare)
  • Uppsala universitetInstitutionen för genetik och patologi (creator_code:org_t)

Sammanhörande titlar

  • Ingår i:Molecular & Cellular Proteomics6:9, s. 1500-15091535-94761535-9484

Internetlänk

Hitta via bibliotek

Till lärosätets databas

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.

 
pil uppåt Stäng

Kopiera och spara länken för att återkomma till aktuell vy