| 1. |
- Dahl, Sara, et al.
(författare)
-
Human host defense peptide LL-37 facilitates double-stranded RNA pro-inflammatory signaling through up-regulation of TLR3 expression in vascular smooth muscle cells
- 2020
-
Ingår i: Inflammation Research. - : Springer Science and Business Media LLC. - 1420-908X .- 1023-3830. ; 69:6, s. 579-588
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- OBJECTIVE: The importance of human host defense peptide LL-37 in vascular innate immunity is not understood. Here, we assess the impact of LL-37 on double-stranded RNA (dsRNA) signaling in human vascular smooth muscle cells.MATERIALS AND METHODS: Cellular import of LL-37 and synthetic dsRNA (poly I:C) were investigated by immunocytochemistry and fluorescence imaging. Transcript and protein expression were determined by qPCR, ELISA and Western blot. Knockdown of TLR3 was performed by siRNA.RESULTS: LL-37 was rapidly internalized, suggesting that it has intracellular actions. Co-stimulation with poly I:C and LL-37 enhanced pro-inflammatory IL-6 and MCP-1 transcripts several fold compared to treatment with poly I:C or LL-37 alone. Poly I:C increased IL-6 and MCP-1 protein production, and this effect was potentiated by LL-37. LL-37-induced stimulation of poly I:C signaling was not associated with enhanced import of poly I:C. Treatment with poly I:C and LL-37 in combination increased expression of dsRNA receptor TLR3 compared to stimulation with poly I:C or LL-37 alone. In TLR3 knockdown cells, treatment with poly I:C and LL-37 in combination had no effect on IL-6 and MCP-1 expression, showing loss of function.CONCLUSIONS: LL-37 potentiates dsRNA-induced cytokine production through up-regulation of TLR3 expression representing a novel pro-inflammatory mechanism.
|
|
| 2. |
- Petruk, Ganna, et al.
(författare)
-
SARS-CoV-2 Spike protein binds to bacterial lipopolysaccharide and boosts proinflammatory activity
- 2020
-
Ingår i: Journal of Molecular Cell Biology. - : Oxford University Press (OUP). - 1759-4685. ; 12:12, s. 916-932
-
Tidskriftsartikel (refereegranskat)abstract
- There is a link between high lipopolysaccharide (LPS) levels in the blood and the metabolic syndrome, and metabolic syndrome predisposes patients to severe COVID-19. Here, we define an interaction between SARS-CoV-2 spike (S) protein and LPS, leading to aggravated inflammation in vitro and in vivo. Native gel electrophoresis demonstrated that SARS-CoV-2 S protein binds to LPS. Microscale thermophoresis yielded a KD of ∼47 nM for the interaction. Computational modeling and all-atom molecular dynamics simulations further substantiated the experimental results, identifying a main LPS-binding site in SARS-CoV-2 S protein. S protein, when combined with low levels of LPS, boosted nuclear factor-kappa B (NF-κB) activation in monocytic THP-1 cells and cytokine responses in human blood and peripheral blood mononuclear cells, respectively. The in vitro inflammatory response was further validated by employing NF-κB reporter mice and in vivo bioimaging. Dynamic light scattering, transmission electron microscopy, and LPS-FITC analyses demonstrated that S protein modulated the aggregation state of LPS, providing a molecular explanation for the observed boosting effect. Taken together, our results provide an interesting molecular link between excessive inflammation during infection with SARS-CoV-2 and comorbidities involving increased levels of bacterial endotoxins.
|
|
| 3. |
- Tillgren, Sofia, et al.
(författare)
-
Imiquimod: ett nytt potentiellt läkemedel för COVID19?
- 2020
-
Ingår i: ; , s. 49-49
-
Konferensbidrag (övrigt vetenskapligt/konstnärligt)abstract
- BakgrundFör att tackla den rådande SARS-COV-2-pandemin har det ställts höga krav på en snabb utveckling och utvärdering av nya antivirala läkemedel. Bland några av de antivirala läkemedelskandidaterna finns imiquimod, en TLR7 agonist normalt administrerad för behandling av könsvårtor och basalcellscarcinom. Eftersom det har påvisats att imiquimod kan öka den antivirala responsen, är vår hypotes att den också skulle kunna användas som ett nyttpotentiellt läkemedel för att behandla COVID19.MetodHumana bronkepitelceller (BECs) från 4 friska och 8 astmatiska patienter odlades fram efter borstprov i samband med bronkoskopi och behandlades med imiquimod ensamt, eller tillsammans med dsRNA samt SARS-COV-2 spike-protein (s-protein) för att härma en virusinfektion. SiRNA mot MDA5 och RIG-I användes också. Cellerna analyserades efter 3 och 24 timmar för uttryck av angiotensin-converting-enzyme-2 (ACE2), interferon-beta (IFNb)samt andra cytokiner involverade i COVID19 med luminex, RT-qPCR och western blot.ResultatObehandlade astmatiska BECs uttrycker mindre ACE2 jämfört med BECs från friska individer. I mekanistiska experiment med astmatiska BECs halverade behandling med imiquimod uttrycket av ACE2 (p<0.05). Imiquimod ökade även uttrycket av IFNb 2 gånger, samtidigt som IL-1b, involverade i cytokinstormar, minskade (p<0.05). Kombination av s-protein och imiquimod ökade IFNb ytterligare 2 gånger (p<0.05). Dessa observationer gjordes även i dsRNA-stimulerade celler som behandlats med imiquimod (p<0.05). SiRNA visade attimiquimods IFNb boostade effekt var reglerad via receptorerna MDA5 och RIG-I.SlutsatsBehandling av BECs med imiquimod visar på tre effekter: minskat uttryck av SARS-COV-2 receptorn ACE2, ökad antiviral kapacitet hos bronkepitelceller samt en minskning av cytokiner involverade i dödliga cytokinstormar.
|
|
