Sökning: onr:"swepub:oai:DiVA.org:umu-130086" >
Improved bi-allelic...
Improved bi-allelic modification of a transcriptionally silent locus in patient-derived iPSC by Cas9 nickase
-
Eggenschwiler, Reto (författare)
-
Moslem, Mohsen (författare)
-
Fráguas, Mariane Serra (författare)
-
visa fler...
-
Galla, Melanie (författare)
-
Papp, Oliver (författare)
-
Naujock, Maximilian (författare)
-
- Fonfara, Ines (författare)
- Umeå universitet,Molekylär Infektionsmedicin, Sverige (MIMS),Umeå Centre for Microbial Research (UCMR),Institutionen för molekylärbiologi (Medicinska fakulteten),Max Planck Institute for Infection Biology, Department of Regulation in Infection Biology, Berlin, Germany
-
Gensch, Ingrid (författare)
-
Wähner, Annabell (författare)
-
Beh-Pajooh, Abbas (författare)
-
Mussolino, Claudio (författare)
-
Tauscher, Marcel (författare)
-
Steinemann, Doris (författare)
-
Wegner, Florian (författare)
-
Petri, Susanne (författare)
-
Schambach, Axel (författare)
-
- Charpentier, Emmanuelle (författare)
- Umeå universitet,Molekylär Infektionsmedicin, Sverige (MIMS),Umeå Centre for Microbial Research (UCMR),Institutionen för molekylärbiologi (Medicinska fakulteten)
-
Cathomen, Toni (författare)
-
Cantz, Tobias (författare)
-
visa färre...
-
(creator_code:org_t)
- 2016-12-02
- 2016
- Engelska.
-
Ingår i: Scientific Reports. - : Nature Publishing Group. - 2045-2322. ; 6
- Relaterad länk:
-
https://doi.org/10.1...
-
visa fler...
-
https://umu.diva-por... (primary) (Raw object)
-
https://www.nature.c...
-
https://urn.kb.se/re...
-
https://doi.org/10.1...
-
http://kipublication...
-
visa färre...
Abstract
Ämnesord
Stäng
- Homology directed repair (HDR)-based genome editing via selectable long flanking arm donors can be hampered by local transgene silencing at transcriptionally silent loci. Here, we report efficient bi-allelic modification of a silent locus in patient-derived hiPSC by using Cas9 nickase and a silencing-resistant donor construct that contains an excisable selection/counter-selection cassette. To identify the most active single guide RNA (sgRNA)/nickase combinations, we employed a lentiviral vector-based reporter assay to determine the HDR efficiencies in cella. Next, we used the most efficient pair of sgRNAs for targeted integration of an improved, silencing-resistant plasmid donor harboring a piggyBac-flanked puro Delta tk cassette. Moreover, we took advantage of a dual-fluorescence selection strategy for bi-allelic targeting and achieved 100% counter-selection efficiency after bi-allelic excision of the selection/counter-selection cassette. Together, we present an improved system for efficient bi-allelic modification of transcriptionally silent loci in human pluripotent stem cells.
Ämnesord
- MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP -- Medicinska och farmaceutiska grundvetenskaper -- Mikrobiologi inom det medicinska området (hsv//swe)
- MEDICAL AND HEALTH SCIENCES -- Basic Medicine -- Microbiology in the medical area (hsv//eng)
Publikations- och innehållstyp
- ref (ämneskategori)
- art (ämneskategori)
Hitta via bibliotek
Till lärosätets databas
- Av författaren/redakt...
-
Eggenschwiler, R ...
-
Moslem, Mohsen
-
Fráguas, Mariane ...
-
Galla, Melanie
-
Papp, Oliver
-
Naujock, Maximil ...
-
visa fler...
-
Fonfara, Ines
-
Gensch, Ingrid
-
Wähner, Annabell
-
Beh-Pajooh, Abba ...
-
Mussolino, Claud ...
-
Tauscher, Marcel
-
Steinemann, Dori ...
-
Wegner, Florian
-
Petri, Susanne
-
Schambach, Axel
-
Charpentier, Emm ...
-
Cathomen, Toni
-
Cantz, Tobias
-
visa färre...
- Om ämnet
-
- MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP
-
MEDICIN OCH HÄLS ...
-
och Medicinska och f ...
-
och Mikrobiologi ino ...
- Artiklar i publikationen
-
Scientific Repor ...
- Av lärosätet
-
Umeå universitet
-
Karolinska Institutet