Engineering of a metal coordinating site into human glutathione transferase M1-1 based on immobilized metal ion affinity chromatography of homologous rat enzymes

Chaga, GrigoriyUppsala universitet,Institutionen för biokemi och organisk kemi (författare)

Rat glutathione transferase (GST) 3-3 binds to Ni(II)-iminodiacetic acid (IDA)-agarose, whereas other GSTs that are abundant in rat liver do not bind to this immobilized metal ion affinity chromatography (IMAC) adsorbent. Rat GST 3-3 contains two superficially located amino acid residues, His84 and His85, that are suitably positioned for coordination to Ni(II)-IDA-agarose. This particular structural motif is lacking in GSTs that do not bind to the IMAC matrix. Creation of an equivalent His-His structure in the homologous human GST M1-1 by protein engineering afforded a mutant enzyme that displays affinity for Ni(II)-IDA-agarose, in contrast to the wild-type GST M1-1. The results identify a distinct site that is operational in IMAC and suggest an approach to the rational design of novel integral metal coordination sites in proteins.

Widersten, MikaelUppsala universitet,Biokemi(Swepub:uu)mikawide (författare)
Andersson, LennartUppsala universitet,Institutionen för biokemi och organisk kemi (författare)
Porath, JerkerUppsala universitet,Biokemi (författare)
Danielson, U HelenaUppsala universitet,Biokemi(Swepub:uu)helenads (författare)
Mannervik, BengtUppsala universitet,Institutionen för biokemi och organisk kemi (författare)
Uppsala universitetInstitutionen för biokemi och organisk kemi (creator_code:org_t)

Ingår i:Protein Engineering: Oxford University Press (OUP)7:9, s. 1115-11190269-21391460-213X
Ingår i:"Protein Engineering, Design and Selection": Oxford University Press (OUP)7:9, s. 1115-11191741-01261741-0134

Av författaren/redakt...: Chaga, Grigoriy; Widersten, Mikae ...; Andersson, Lenna ...; Porath, Jerker; Danielson, U Hel ...; Mannervik, Bengt

Om ämnet

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.