A screening method for phosphohistidine phosphatase 1 activity

↓ Direkt till sidans innehåll
↓ Direkt till sidans sekundära innehåll (sidomenyn)

Sökning: id:"swepub:oai:DiVA.org:uu-156940" > A screening method ...

1 av 1
Föregående post
Nästa post
Till träfflistan

Beckman-Sundh, UllaUppsala universitet,Institutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi (författare)

A screening method for phosphohistidine phosphatase 1 activity

Artikel/kapitelEngelska2011

Förlag, utgivningsår, omfång ...

2011-06-17
Uppsala Medical Society,2011
printrdacarrier

Nummerbeteckningar

LIBRIS-ID:oai:DiVA.org:uu-156940
https://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-156940URI
https://doi.org/10.3109/03009734.2011.585253DOI

Kompletterande språkuppgifter

Språk:engelska
Sammanfattning på:engelska

Ingår i deldatabas

SwePubSwePub

Klassifikation

Ämneskategori:ref swepub-contenttype
Ämneskategori:art swepub-publicationtype

Anmärkningar

Introduction. Research in the field of protein-bound phosphohistidine phosphorylation has been hampered by the difficulties in analysis and detection of phosphohistidine. Therefore a screening method was developed primarily for the analysis of phosphohistidine phosphatase 1 (PHPT1) activity. Methods. A highly positively charged substrate, Ac-Val-Arg-Leu-Lys-His-Arg-Lys-Leu-Arg-pNA, containing the peptide surrounding the phosphorylated histidine in ion channel KCa3.1 was chemically phosphorylated using phosphoramidate. Excess phosphoramidate was removed by anion exchange chromatography using a micro spin column. After incubation of the eluate with PHPT1, the removed phosphate was bound on a consecutive anion exchange spin column. The eluate was assayed in a micro plate format for remaining phosphate in the substrate Ac-Val-Arg-Leu-Lys-His(P)-Arg-Lys-Leu-Arg-pNA. Histone H4, also highly positive in charge, was subjected to the same procedure to explore the possibility to use other substrates to PHPT1 in this assay format. Results. It was found that Ac-Val-Arg-Leu-Lys-His(P)-Arg-Lys-Leu-Arg-pNA and phosphohistone H4 were dephosphorylated by PHPT1. The apparent K(m) for Ac-Val-Arg-Leu-Lys-His(P)-Arg-Lys-Leu-Arg-pNA was in the order of 10 mu M. Using this method, phosphohistidine phosphatase activity was detected in mouse liver cell sap with Ac-Val-Arg-Leu-Lys-His(P)-Arg-Lys-Leu-Arg-pNA as substrate. Discussion. The described method for determination of PHPT1 activity is comparably much easier and faster than presently used methods for detection of phosphohistidine phosphatase activity. It is also sensitive, since the lower activity limit was 5 pmol phosphate released per min. It has the potential to be used both for more rapid screening for inhibitors and activators to phosphohistidine phosphatases and for screening of histidine kinases.

Ämnesord och genrebeteckningar

MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP Medicinska och farmaceutiska grundvetenskaper Mikrobiologi inom det medicinska området hsv//swe
MEDICAL AND HEALTH SCIENCES Basic Medicine Microbiology in the medical area hsv//eng
Activity
assay
phosphohistidine phosphatase
PHPT1
protein histidine phosphatase
Medical microbiology
Medicinsk mikrobiologi

Biuppslag (personer, institutioner, konferenser, titlar ...)

Ek, BoUppsala universitet,Analytisk kemi,Institutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi,Science for Life Laboratory, SciLifeLab(Swepub:uu)boaek194 (författare)
Zetterqvist, ÖrjanUppsala universitet,Institutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi(Swepub:uu)oze13294 (författare)
Ek, PiaUppsala universitet,Institutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi(Swepub:uu)pek21046 (författare)
Uppsala universitetInstitutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi (creator_code:org_t)

Sammanhörande titlar

Ingår i:Upsala Journal of Medical Sciences: Uppsala Medical Society116:3, s. 161-1680300-97342000-1967

Internetlänk

Hitta via bibliotek

Upsala Journal of Medical Sciences (Sök värdpublikationen i LIBRIS)

Till lärosätets databas

1 av 1
Föregående post
Nästa post
Till träfflistan

Hitta mer i SwePub

Av författaren/redakt...: Beckman-Sundh, U ...; Ek, Bo; Zetterqvist, Örj ...; Ek, Pia

Om ämnet

MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP: MEDICIN OCH HÄLS ...; och Medicinska och f ...; och Mikrobiologi ino ...

Artiklar i publikationen: Upsala Journal o ...

Av lärosätet: Uppsala universitet

Sök utanför SwePub

Sök vidare i:: Google; Google Book Search; Google Scholar

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.

LIBRIS.kb.se