SwePub
Sök i LIBRIS databas

  Utökad sökning

WFRF:(Hust Michael)
 

Sökning: WFRF:(Hust Michael) > Single Chain Antibo...

  • Blokzijl, AndriesUppsala universitet,Institutionen för immunologi, genetik och patologi,YUMAB GmbH, Rebenring 33, D-38106 Braunschweig, Germany. (författare)

Single Chain Antibodies as Tools to Study transforming growth factor--Regulated SMAD Proteins in Proximity Ligation-Based Pharmacological Screens

  • Artikel/kapitelEngelska2016

Förlag, utgivningsår, omfång ...

  • 2016
  • printrdacarrier

Nummerbeteckningar

  • LIBRIS-ID:oai:DiVA.org:uu-299590
  • https://urn.kb.se/resolve?urn=urn:nbn:se:uu:diva-299590URI
  • https://doi.org/10.1074/mcp.M115.055756DOI

Kompletterande språkuppgifter

  • Språk:engelska
  • Sammanfattning på:engelska

Ingår i deldatabas

Klassifikation

  • Ämneskategori:ref swepub-contenttype
  • Ämneskategori:art swepub-publicationtype

Anmärkningar

  • The cellular heterogeneity seen in tumors, with subpopulations of cells capable of resisting different treatments, renders single-treatment regimens generally ineffective. Accordingly, there is a great need to increase the repertoire of drug treatments from which combinations may be selected to efficiently target sets of pathological processes, while suppressing the emergence of resistance mutations. In this regard, members of the TGF- signaling pathway may furnish new, valuable therapeutic targets. In the present work, we developed in situ proximity ligation assays (isPLA) to monitor the state of the TGF- signaling pathway. Moreover, we extended the range of suitable affinity reagents for this analysis by developing a set of in-vitro-derived human antibody fragments (single chain fragment variable, scFv) that bind SMAD2 (Mothers against decapentaplegic 2), 3, 4, and 7 using phage display. These four proteins are all intracellular mediators of TGF- signaling. We also developed an scFv specific for SMAD3 phosphorylated in the linker domain 3 (p179 SMAD3). This phosphorylation has been shown to inactivate the tumor suppressor function of SMAD3. The single chain affinity reagents developed in the study were fused tocrystallizable antibody fragments (Fc-portions) and expressed as dimeric IgG-like molecules having Fc domains (Yumabs), and we show that they represent valuable reagents for isPLA. Using these novel assays, we demonstrate that p179 SMAD3 forms a complex with SMAD4 at increased frequency during division and that pharmacological inhibition of cyclin-dependent kinase 4 (CDK4)(1) reduces the levels of p179SMAD3 in tumor cells. We further show that the p179SMAD3-SMAD4 complex is bound for degradation by the proteasome. Finally, we developed a chemical screening strategy for compounds that reduce the levels of p179SMAD3 in tumor cells with isPLA as a read-out, using the p179SMAD3 scFv SH544-IIC4. The screen identified two kinase inhibitors, known inhibitors of the insulin receptor, which decreased levels of p179SMAD3/SMAD4 complexes, thereby demonstrating the suitability of the recombinant affinity reagents applied in isPLA in screening for inhibitors of cell signaling.

Ämnesord och genrebeteckningar

Biuppslag (personer, institutioner, konferenser, titlar ...)

  • Zieba, AgataUppsala universitet,Molekylära verktyg(Swepub:uu)agazi628 (författare)
  • Hust, MichaelTech Univ Carolo Wilhelmina Braunschweig, Inst Biochem Biotechnol & Bioinformat, Dept Biotechnol, Spielmannstr 7, D-38106 Braunschweig, Germany. (författare)
  • Schirrmann, ThomasTech Univ Carolo Wilhelmina Braunschweig, Inst Biochem Biotechnol & Bioinformat, Dept Biotechnol, Spielmannstr 7, D-38106 Braunschweig, Germany.;YUMAB GmbH, Rebenring 33, D-38106 Braunschweig, Germany. (författare)
  • Helmsing, SaskiaTech Univ Carolo Wilhelmina Braunschweig, Inst Biochem Biotechnol & Bioinformat, Dept Biotechnol, Spielmannstr 7, D-38106 Braunschweig, Germany. (författare)
  • Grannas, KarinUppsala universitet,Institutionen för immunologi, genetik och patologi(Swepub:uu)kargr691 (författare)
  • Hertz, EllenUppsala universitet,Institutionen för immunologi, genetik och patologi (författare)
  • Morén, AnitaUppsala universitet,Ludwiginstitutet för cancerforskning(Swepub:uu)anitmore (författare)
  • Chen, LeiUppsala universitet,Molekylära verktyg(Swepub:uu)leich344 (författare)
  • Söderberg, OlaUppsala universitet,Molekylära verktyg(Swepub:uu)olasoder (författare)
  • Moustakas, AristidisUppsala universitet,Institutionen för medicinsk biokemi och mikrobiologi,Ludwiginstitutet för cancerforskning(Swepub:uu)arimo287 (författare)
  • Dubel, StefanTech Univ Carolo Wilhelmina Braunschweig, Inst Biochem Biotechnol & Bioinformat, Dept Biotechnol, Spielmannstr 7, D-38106 Braunschweig, Germany. (författare)
  • Landegren, UlfUppsala universitet,Molekylära verktyg(Swepub:uu)ulfland (författare)
  • Uppsala universitetInstitutionen för immunologi, genetik och patologi (creator_code:org_t)

Sammanhörande titlar

  • Ingår i:Molecular & Cellular Proteomics15:6, s. 1848-18561535-94761535-9484

Internetlänk

Hitta via bibliotek

Till lärosätets databas

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.

 
pil uppåt Stäng

Kopiera och spara länken för att återkomma till aktuell vy