Structural and biophysical analysis of a Haemophilus influenzae tripartite ATP-independent periplasmic (TRAP) transporter

Tripartite ATP-independent periplasmic (TRAP) transporters are secondary-active transporters that receive their substrates via a soluble-binding protein to move bioorganic acids across bacterial or archaeal cell membranes. Recent cryo-electron microscopy (cryo-EM) structures of TRAP transporters provide a broad framework to understand how they work, but the mechanistic details of transport are not yet defined. Here we report the cryo-EM structure of the Haemophilus influenzae N-acetylneuraminate TRAP transporter (HiSiaQM) at 2.99 & Aring; resolution (extending to 2.2 & Aring; at the core), revealing new features. The improved resolution (the previous HiSiaQM structure is 4.7 & Aring; resolution) permits accurate assignment of two Na+ sites and the architecture of the substrate-binding site, consistent with mutagenic and functional data. Moreover, rather than a monomer, the HiSiaQM structure is a homodimer. We observe lipids at the dimer interface, as well as a lipid trapped within the fusion that links the SiaQ and SiaM subunits. We show that the affinity (K-D) for the complex between the soluble HiSiaP protein and HiSiaQM is in the micromolar range and that a related SiaP can bind HiSiaQM. This work provides key data that enhances our understanding of the 'elevator-with-an-operator' mechanism of TRAP transporters.

Davies, James S.Stockholms universitet,Institutionen för biokemi och biofysik,University of Canterbury, New Zealand(Swepub:su)jada9962 (författare)
Scalise, Mariafrancesca (författare)
Gulati, Ashutosh,1986-Stockholms universitet,Institutionen för biokemi och biofysik(Swepub:su)asgu7165 (författare)
Drew, David,1976-Stockholms universitet,Institutionen för biokemi och biofysik(Swepub:su)drew (författare)
Newton-Vesty, Michael C. (författare)
Abeysekera, Gayan S. (författare)
Subramanian, Ramaswamy (författare)
Wahlgren, Weixiao Yuan,1970Gothenburg University,Göteborgs universitet,Institutionen för kemi och molekylärbiologi,Department of Chemistry and Molecular Biology(Swepub:gu)xyuawe (författare)
Friemann, Rosmarie,1975Gothenburg University,Göteborgs universitet,CARe - Centrum för antibiotikaresistensforskning,Centre for antibiotic resistance research, CARe(Swepub:gu)xfriro (författare)
Allison, Jane R. (författare)
Mace, Peter D. (författare)
Griffin, Michael D. W. (författare)
Demeler, Borries (författare)
Wakatsuki, Soichi (författare)
Drew, David (författare)
Indiveri, Cesare (författare)
Dobson, Renwick C. J. (författare)
North, Rachel A.Stockholms universitet,Institutionen för biokemi och biofysik,University of Sydney, Australia(Swepub:su)rano0610 (författare)
Stockholms universitetInstitutionen för biokemi och biofysik (creator_code:org_t)

Om ämnet

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.