Polymemse chain reaction using mixed primers. Cloning of human monoclonal antibody variable region genes from single hybridoma cells

We describe a general approach to rapidly obtain the DNA sequence encoding the variable region of any immunoglobulin chain using the polymerase chain reaction and a mixture of upstream primers corresponding to the leader sequence, and one downstream primer designed from the conserved nucleotide sequence of the constant region. The approach was applied to five different hybridomas producing human monoclonal antibodies and variable regions for both bold gamma and mu heavy chain and kappa and lambda light chain genes were successfully cloned. cDNA encoding variable regions could be amplified from single hybridoma cells isolated by micromanipulation. This approach will permit analysis of B cell clonal ontogeny, antibody diversity and lymphoma cell progression and heterogeneity. It will also facilitate structural and functional studies of immunoglobulins as well as the rapid construction of chimeric antibodies.

Danielsson, Lena (författare)
Brenner, Carol A (författare)
Wallace, Ellen F (författare)
Abrahamson, MagnusLund University,Lunds universitet,Avdelningen för klinisk kemi och farmakologi,Institutionen för laboratoriemedicin,Medicinska fakulteten,Division of Clinical Chemistry and Pharmacology,Department of Laboratory Medicine,Faculty of Medicine(Swepub:lu)kkem-mab (författare)
Fry, Kirk E (författare)
Borrebaeck, CarlLund University,Lunds universitet,Institutionen för immunteknologi,Institutioner vid LTH,Lunds Tekniska Högskola,Department of Immunotechnology,Departments at LTH,Faculty of Engineering, LTH(Swepub:lu)immt-cbo (författare)
Avdelningen för klinisk kemi och farmakologiInstitutionen för laboratoriemedicin (creator_code:org_t)

Ingår i:Bio/Technology: Springer Science and Business Media LLC7:9, s. 934-9380733-222X
Ingår i:Nature Biotechnology: Springer Science and Business Media LLC7:9, s. 934-9381087-01561546-1696

Av författaren/redakt...: Larrick, James W; Danielsson, Lena; Brenner, Carol A; Wallace, Ellen F; Abrahamson, Magn ...; Fry, Kirk E; visa fler...; Borrebaeck, Carl; visa färre...

Om ämnet

MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP: MEDICIN OCH HÄLS ...; och Medicinska och f ...; och Farmakologi och ...

MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP: MEDICIN OCH HÄLS ...; och Medicinska och f ...; och Läkemedelskemi

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.