Site-specific photocoupling of pBpa mutated scFv antibodies for use in affinity proteomics

Brofelth, MattiasLund University,Lunds universitet,Institutionen för immunteknologi,Institutioner vid LTH,Lunds Tekniska Högskola,Department of Immunotechnology,Departments at LTH,Faculty of Engineering, LTH (författare)

Recombinant antibody libraries can provide a source of renewable and high-performing binders tailored for use in affinity proteomics. In this context, the process of generating site-specific 1:1 tagging/functionalization and/or orientated surface immobilization of antibodies has, however, proved to be challenging. Hence, novel ways of generating such engineered antibodies for use in affinity proteomics could have a major impact on array performance. In this study, we have further tailored the design of human recombinant scFv antibodies for site-specific photocoupling through the use of an unnatural amino acid (UAA) and the Dock'n'Flash technology. In more detail, we have generated the 2nd generation of scFvs carrying the photoreactive UAA p-benzoyl-l-phenylalanine (pBpa). Based on key properties, such as expression levels, activity, and affinity, a preferred choice of site for pBpa, located in the beginning of the C-terminal affinity-tag, was for the first time pin-pointed. Further, the results showed that pBpa mutated antibody could be site-specifically photocoupled to free and surface immobilized β-cyclodextrin (an affinity ligand to pBpa). This paves the way for use of scFv antibodies, engineered for site-specific photochemical-based tagging, functionalization, and orientated surface immobilization, in affinity proteomics.

Städe, Lars WagnerAalborg University (författare)
Ekstrand, Anna IsingerLund University,Lunds universitet,Institutionen för immunteknologi,Institutioner vid LTH,Lunds Tekniska Högskola,Department of Immunotechnology,Departments at LTH,Faculty of Engineering, LTH(Swepub:lu)onk-ais (författare)
Petersson Edfeldt, LinnLund University,Lunds universitet,Institutionen för immunteknologi,Institutioner vid LTH,Lunds Tekniska Högskola,Department of Immunotechnology,Departments at LTH,Faculty of Engineering, LTH(Swepub:lu)immu-lip (författare)
Kovačič, RebekaLund University (författare)
Nielsen, Thorbjørn TerndrupAalborg University (författare)
Larsen, Kim LambertsenAalborg University (författare)
Duroux, LaurentAalborg University (författare)
Wingren, ChristerLund University,Lunds universitet,Institutionen för immunteknologi,Institutioner vid LTH,Lunds Tekniska Högskola,Department of Immunotechnology,Departments at LTH,Faculty of Engineering, LTH(Swepub:lu)immt-cwi (författare)
Institutionen för immunteknologiInstitutioner vid LTH (creator_code:org_t)

Ingår i:Biochimica et Biophysica Acta - Proteins and Proteomics: Elsevier BV1865:8, s. 985-9961570-9639

Av författaren/redakt...: Brofelth, Mattia ...; Städe, Lars Wagn ...; Ekstrand, Anna I ...; Petersson Edfeld ...; Kovačič, Rebeka; Nielsen, Thorbjø ...; visa fler...; Larsen, Kim Lamb ...; Duroux, Laurent; Wingren, Christe ...; visa färre...

Om ämnet

MEDICIN OCH HÄLSOVETENSKAP: MEDICIN OCH HÄLS ...; och Medicinska och f ...; och Immunologi inom ...

TEKNIK OCH TEKNOLOGIER: TEKNIK OCH TEKNO ...; och Medicinteknik; och Annan medicintek ...

Kungliga biblioteket hanterar dina personuppgifter i enlighet med EU:s dataskyddsförordning (2018), GDPR. Läs mer om hur det funkar här.
Så här hanterar KB dina uppgifter vid användning av denna tjänst.